使用快速色谱优化肽纯化

自动化固相肽合成 (SPPS) 取得了进展，例如对复杂肽使用高温，但纯化仍然是肽合成工作流程的主要瓶颈。粗肽通常包含与目标样品具有相似保留特性的杂质，而 RP-HPLC 作为标准纯化方法，受到回收率低、分离时间长、成本高和载样量有限的限制。

哥本哈根大学 Knud Jensen 教授的研究小组 2021 年的一项研究调查了使用高效反相快速色谱 (HPFC) 作为快速纯化合成肽的可行方法。根据粗肽的质量，HPFC 用作的纯化方法，或用作多步骤过程的一部分，以在最终 RP-HPLC 纯化之前去除杂质。

该研究检查了各种肽，包括 APH3，一种 44 个氨基酸的抗平行卷曲螺旋肽。将一批 300 mg 的粗 APH3(初始纯度为 ~35%)分成两份 150 mg 的部分，一份使用 HPLC 纯化，另一份使用 HPFC 纯化。

事实证明，产量相似，HPFC 产生 30 mg 纯肽(纯度为 >97%)，HPLC 回收 33 mg。然而，溶剂消耗量差异很大。HPLC 需要 1777 mL 溶剂 A(含 0.1% 甲酸的水)和 1514 mL 溶剂 B(含 0.1% 甲酸的乙腈)，而 HPFC 仅使用 1041 mL 溶剂 A 和 477 mL 溶剂 B。

HPLC 需要 4 次进样，而 HPFC 只需要 1 次进样，显著提高了肽纯化的速度和通量。HPLC 的总纯化时间为 160 分钟，而 HPFC 仅为 27 分钟。

使用 HPFC 进行肽纯化的总结显示，例如，Penetratin 的纯度为 92%，产率为 66%，而 GLP-1N 的纯度为 98%，产率为 20%。这突出了 HPFC 在纯化不同类型肽方面的灵活性和多功能性。

该研究得出结论，HPFC 是传统 RP-HPLC 的快速高效替代方案，与 RP-HPLC 相比，每次进样的肽载量更大，同时显著减少纯化时间、溶剂消耗和成本。

除了比较这两种方法之外，该研究还提供了有关选择色谱柱、洗脱液和梯度以实现成功 HPFC 的详细指南，帮助研究人员将该技术整合到他们的肽纯化工作流程中。